常用缓冲溶液配制方法

常用缓冲溶液的配制方法

1． 甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）

X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 pH 2.0 2.4 2.6 2.8 X 50 50 50 50 Y 44.0 32.4 24.2 16.8 pH 3.0 3.2 3.4 3.6 X 50 50 50 50 Y 11.4 8.2 6.4 5.0 甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。

2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L）

X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到20毫升 pH(20℃) 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 X 5 5 5 5 5 Y 4.070 3.960 3.295 2.642 2.022 pH(20℃) 3.2 3.4 3.6 3.8 X 5 5 5 5 Y 1.470 0.990 0.597 0.263 邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升

3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液

pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 19.15 19.45 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。

Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。 C4H2O7·H2O分子量 = 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。

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4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液

pH 2.2 3.1 3.3 4.3 5.3 5.8 6.5 钠离子浓度 （mol/L） 0.20 0.20 0.20 0.20 0.35 0.45 0.38 柠檬酸（克） 氢氧化钠(克) 盐酸（毫升） 最终体积①NaOH 97% C6H8O7·H2O HCl（浓） （升） 210 210 210 210 245 285 266 84 83 83 83 144 186 156 160 116 106 45 68 105 126 10 10 10 10 10 10 10 ① 使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50% 氢氧化钠溶

液或浓盐酸调节，冰箱保存。

5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L）

pH 0.1 mol/L 柠檬酸 （毫升） 18.6 17.2 16.0 14.9 14.0 13.1 12.3 11.4 10.3 9.2 0.1 mol/L 柠檬酸钠 （毫升） 1.4 2.8 4.0 5.1 6.0 6.9 7.7 8.6 9.7 10.8 pH 0.1 mol/L 柠檬酸 （毫升） 8.2 7.3 6.4 5.5 4.7 3.8 2.8 2.0 1.4 0.1 mol/L 柠檬酸钠 （毫升） 11.8 12.7 13.6 14.5 15.3 16.2 17.2 18.0 18.6 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 柠檬酸C6H8O7·H2O：分子量210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。

柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。

6．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L） pH(18℃) 2.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 0.2 mol/L NaAc (毫升) 0.75 1.20 1.80 2.65 3.70 4.90 0.3 mol/L HAc (毫升) 9.25 8.80 8.20 7.35 6.30 5.10 pH(18℃) 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 0.2 mol/L NaAc (毫升) 5.90 7.00 7.90 8.60 9.10 9.40 0.3 mol/L HAc (毫升) 4.10 3.00 2.10 1.40 0.90 0.60 Na2Ac·3H2O分子量 = 136.09，0.2 mol/L溶液为27.22克/升。

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7．磷酸盐缓冲液

（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（0.2） pH 5.8 5.9 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 0.2 mol/L Na2HPO4 (毫升) 8.0 10.0 12.3 15.0 18.5 22.5 26.5 31.5 37.5 43.5 49.5 55.0 0.2 mol/L NaH2PO4 (毫升) 92.0 90.0 87.7 85.0 81.5 77.5 73.5 68.5 62.5 56.5 51.0 45.0 pH 7.0 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 0.2 mol/L Na2HPO4 (毫升) 61.0 67.0 72.0 77.0 81.0 84.0 87.0 89.5 91.5 93.0 94.7 0.2 mol/L NaH2PO4 (毫升) 39.0 33.0 28.0 23.0 19.0 16.0 13.0 10.5 8.5 7.0 5.3 Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液为85.61克/升。 Na2HPO4·12H2O分子量 = 358.14，0.2 mol/L溶液为71.628克/升。 NaH2PO4·2H2O分子量 = 156.01，0.2 mol/L溶液为31.202克/升。

磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽：NaH2PO4： pKa1＝2.12，pKa2＝7.21； Na2HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32

配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝1～4，

配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8， 配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10～12。

用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。

磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH 范围宽；③pH 受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH 变化小，如稀释10倍后pH 的变化小于0.1。

其缺点为：①易与常见的钙Ca2+离子、镁Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。

（2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L） pH 4.92 5.29 5.91 mol/L/15Na2HPO4 (毫升) 0.10 0.50 1.00 mol/L//15KH2PO4 (毫升) 9.90 9.50 9.00 pH 7.17 7.38 7.73 mol/L//15Na2HPO4 mol/L//15KH2PO4 (毫升) (毫升) 7.00 8.00 9.00 3.00 2.00 1.00 完美WORD格式

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6.24 6.47 6.64 6.81 6.98 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 8.00 7.00 6.00 5.00 4.00 8.04 8.34 8.67 8.18 9.50 9.75 9.90 10.00 0.50 0.25 0.10 0 Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05，1/15M溶液为11.876克/升。 KH2PO4分子量 = 136.09，1/15M溶液为9.078克/升。

8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M）

X毫升0.2M K2PO4 + Y毫升0.2N NaOH加水稀释至29毫升 pH(20℃) 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 X (毫升) 5 5 5 5 5 5 Y（毫升） 0.372 0.570 0.860 1.260 1.780 2.365 pH(20℃) 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 X (毫升) 5 5 5 5 5 5 Y（毫升） 2.963 3.500 3.950 4.280 4.520 4.680 9．巴比妥钠-盐酸缓冲液（18℃）

pH 0.04M巴比妥钠溶液 100 100 100 100 100 100 100 100 0.2V盐酸 pH 0.04M巴比妥钠溶液(毫升) 100 100 100 100 100 100 100 100 0.2N盐酸(毫升) 5.21 3.82 2.52 1.65 1.13 0.70 0.35 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 8.2 18.4 17.8 16.7 15.3 13.4 11.47 9.39 7.21 8.4 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 9.6 巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M溶液为8.25克/升

10．Tris–盐酸缓冲液（0.05M，25℃）

50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫升。 pH 7.10 7.20 7.30 7.40 7.50 7.60 7.70 7.80 X(毫升) 45.7 44.7 43.4 42.0 40.3 38.5 36.6 34.5 pH 8.10 8.20 8.30 8.40 8.50 8.60 8.70 8.80 X(毫升) 26.2 22.9 19.9 17.2 14.7 12.4 10.3 8.5 完美WORD格式

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7.90 8.00 32.0 29.2 8.90 7.0 三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2 CH2OH C

HOCH2 NH2

分子量=121.14;

0. 1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。

11．硼酸–硼砂缓冲液（0.2M硼酸根） pH 7.4 7.6 7.8 8.0 0.05M硼砂（毫升） 1.0 1.5 2.0 3.0 0.2M硼酸（毫升） 9.0 8.5 8.0 7.0 pH 8.2 8.4 8.7 9.0 0.05M硼砂（毫升） 3.5 4.5 6.0 8.0 0.2M硼酸（毫升） 6.5 5.5 4.0 2.0 硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=381.37;0.05M溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。 硼酸H3BO3,分子量=61.83,0.2M溶液为12.37克/升。 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M）

X毫升0.2M甘氨酸+Y毫升0.2NnaOH加水稀释至200毫升 pH 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 X 50 50 50 50 50 Y 4.0 6.0 8.8 12.0 16.8 pH 9.6 9.8 10.0 10.4 10.6 X 50 50 50 50 50 Y 22.4 27.2 32.0 38.6 45.5 甘氨酸分子量=75.07;0.2M溶液含15.01克/升。

13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）

X毫升0.05M硼砂+Y毫升0.2NNaOH加水稀释至200毫升 pH 9.3 9.4 9.6 X 50 50 50 Y 6.0 11.0 23.0 pH 9.8 10.0 10.1 X 50 50 50 Y 34.0 43.0 46.0 硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=381.43;0.05M溶液为19.07克/升。

14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M） Ca2+、Mg2+存在时不得使用 pH 20℃ 9.16 9.40 9.51 9.78 37℃ 8.77 9.12 9.40 9.50 1 2 3 4 9 8 7 6 0.1MNa2CO3(毫升) 0.1MN2HCO3(毫升) 完美WORD格式

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9.90 10.14 10.28 10.53 10.83 9.72 9.90 10.08 10.28 10.57 5 6 7 8 9 5 4 3 2 1 Na2CO2·10H2O分子量=286.2;0.1M溶液为28.62克/升。 N2HCO3分子量=84.0;0.1M溶液为8.40克/升。

15．“PBS”缓冲液 pH H2O NaCl Na2HPO4 NaH2PO4

7.6 1000 8.5 2.2 0.1 7.4 1000 8.5 2.2 0.2 7.2 1000 8.5 2.2 0.3 7.0 100ml 8.5g 2.2g 0.4g 完美WORD格式

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pH标准缓冲溶液 Standard pH Buffer Solutions

名称配 制 不同温度时的pH值(pH in different temperatures) 5℃ 10℃ 15℃ 20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ (Name) (Compounding way) 0℃ 草酸盐标准缓c[KH3(C2O4)2·2H2O]为0.05mol/L。称取1.67 1.67 1.67 1.67 1.68 1.68 1.69 1.69 1.69 不同温度时的pH值(pH in different temperatures) 45℃ 50℃ 55℃ 60℃ 70℃ 80℃ 90℃ 95℃ 1.70 1.71 1.72 1.72 1.74 1.77 1.79 1.81 不同温度时的pH值(pH in different temperatures) 0℃ - 5℃ 10℃ 15℃ 20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ - - - - 3.56 3.55 3.55 3.55 - - 冲溶液 12.71g四草酸钾[KH3(C2O4)2·2H2O]溶于无二氧化碳的水中，稀释至1000ml 酒石酸盐标准缓冲溶液 在25℃时，用无二氧化碳的水溶解外消旋的酒石酸氢钾(KHC4H4O6)，并剧烈振摇至成饱和溶液 不同温度时的pH值(pH in different temperatures) 45℃ 50℃ 55℃ 60℃ 70℃ 80℃ 90℃ 95℃ 3.55 3.55 3.55 3.56 3.58 3.61 3.65 3.67 苯二甲酸氢盐标准缓- - c(C6H4CO2HCO2K)为0.05mol/L，称取于(115.0±5.0)℃干0℃ 不同温度时的pH值(pH in different temperatures) 5℃ 10℃ 15℃ 20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ 冲溶液 燥 2～3h的邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.01 4.01 4.02 4.04 10.21g，溶于无CO2的蒸馏水，并稀释至1000ml （注：可用于酸度计校准） 磷酸盐标准缓分别称取在(115.0±5.0)℃干燥2～0℃ 5℃ 10℃ 15℃ 20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ （Na2HPO4）(3．53±0．01)g和磷酸二氢钾（KH2PO4） (3．39±0．01)g，溶于预先煮沸过15～不同温度时的pH值(pH in different temperatures) 45℃ 50℃ 55℃ 60℃ 70℃ 80℃ 90℃ 95℃ - 6.98 6.95 6.92 6.90 6.88 6.86 6.85 6.84 6.84 不同温度时的pH值(pH in different temperatures) 45℃ 50℃ 55℃ 60℃ 70℃ 80℃ 90℃ 95℃ 4.05 4.06 4.08 4.09 4.13 4.16 4.21 4.23 不同温度时的pH值(pH in different temperatures) - - 冲溶液 3h的磷酸氢二钠 完美WORD格式

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30min并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml（注：可用于酸度计校准） 硼酸盐标准缓6.83 6.83 6.83 6.84 6.85 6.86 6.88 6.89 - c(Na2B4O7·10H2O)称取硼砂0℃ 不同温度时的pH值(pH in different temperatures) 5℃ 10℃ 15℃ 20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ 冲溶液 （Na2B4O7·10H2O）(3．80± 0．01)g（注意：不能烘！），9.46 9.40 9.33 9.27 9.22 9.18 9.14 9.10 9.06 溶于预先煮沸过 15～30min并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。存放时要防止空气中的CO2的进入（注：可用于酸度计校准） 氢氧化钙标准缓冲溶液 在25℃，用无二氧化碳的蒸馏水制备氢氧化钙的饱和溶液。氢氧化钙溶液的浓度c[1/2Ca(OH)2]应在（0.0400～0.0412）mol/L。氢氧化钙溶液的浓度可以酚红为指示剂，用盐酸标准溶液[c(HCl)=0.1mol/L]滴定测出。存放时要防止空气中的二氧化碳的进入。出现混浊应弃去重新配制 11.84 11.71 11.57 11.45 - - - - - 不同温度时的pH值(pH in different temperatures) 45℃ 50℃ 55℃ 60℃ 70℃ 80℃ 90℃ 95℃ - 13.42 13.21 13.00 12.81 12.63 12.45 12.30 12.14 11.98 0℃ 5℃ 10℃ 15℃ 20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ 不同温度时的pH值(pH in different temperatures) 9.04 9.01 8.99 8.96 8.92 8.89 8.85 8.83 - 不同温度时的pH值(pH in different temperatures) 45℃ 50℃ 55℃ 60℃ 70℃ 80℃ 90℃ 95℃ - 注：为保证pH值的准确度，上述标准缓冲溶液必须使用pH基准试剂配制。

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常用pH缓冲溶液的配制和pH值

Preparation and pH Values of Common pH Buffer Solutions

序号(No.) 1 2 3 溶液名称 (Solution name) 氯化钾-盐酸 氨基乙酸-盐酸 一氯乙酸-氢氧化钠 邻苯二甲酸氢钾-盐酸 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠 六亚甲基四胺-盐酸 磷酸二氢钾-氢氧化钠 硼酸-氯化钾-氢氧化钠 氯化铵-氨水 硼酸-氯化钾-氢氧化钠 氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠 磷酸氢二钠-氢氧化钠 氯化钾-氢氧化钠 配制方法 (Preparation) 13.0 ml 0.2 mol/L HCl 与25.0 ml 0.2 mol/L KCl混合均匀后，加水稀释至100 ml 在500 ml 水中溶解氨基乙酸150 g，加480 ml浓盐酸，再加水稀释至1L 在200 ml 水中溶解2 g 一氯乙酸后，加40 g NaOH，溶解完全后再加水稀释至1 L 把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与6.0 ml 0.1 mol/L HCl混合均匀，加水稀释至100 ml 把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与17.5 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml 在200 ml水中溶解六亚甲基四胺40 g，加浓HCl 10 ml，再加水稀释至1 L 把25.0 ml 0.2 mol/L的磷酸二氢钾与23.6 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml 把25.0 ml 0.2 mol/L的硼酸-氯化钾与4.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml 把0.1 mol/L 氯化铵与0.1 mol/L 氨水以2：1比例混合均匀 把25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与43.9 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml 把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸-氯化钠与51.0 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀 把 50.0 ml 0.05 mol/L Na2HPO4与26.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml 把 25.0 ml 0.2 mol/L KCl与66.0 ml 0.2 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml 13.0 12.0 11.6 10.0 5.4 6.8 8.0 9.1 4.8 3.6 pH值 (pH value) 1.7 2.3 2.8 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

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